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PCR试验室污染的起源及控制方法

发布时间:2020-03-20 15:25来源:原创 点击次数:

PCR试验室污染的起源及控制方法

 

  PCR可从痕量的DNA扩增出少量的产品,使得PCR特别轻易遭到污染,主如果因为操作时发朝气溶胶而惹起的。污染的能够有3个起源:一是来自其它测试样品的DNA;二是来自试验资料如重组克隆的DNA;三是来自统一靶序列前一次PCR的扩增产品,这类污染平日称为“遗留”污染,是较为费事的一种。下面为大年夜家引见一下控制污染的方法。

  1.分区控制污染

  把PCR试验室的各局部在区域上分为样品制备、前PCR区和后PCR区。在分歧的地点停止的目标是为了防止污染,即旧的PCR产品在对新的PCR剖析的污染、分子克隆的污染和样品与样品之间的污染。

  将过程的各局部在区域上离开需求额外的空间、资金和装备,但这一方法应当是任何污染控制计谋的中间局部,须停止资金等投入。

  2.UNG控制污染

  应用尿嘧啶DNA-糖苷酶(UNG),并用脱氧尿苷三磷酸(dUTP)替换脱氧胸苷三磷酸(dUTP)。其做法是将一切的扩增反应与UNG酶停止预反应,可以去除残留在DNA中的dU,发生数十或数百的无碱基位点,DNA聚合酶会在这些位点处停止。而且这些位点是不动摇的,在热轮回中会爆发断裂,每种毁伤都邑防止重扩增的爆发。产品越长,UNG去污染的效力就越高,但对短于100bp的产品不能用UNG完整消弭污染。

  3.紫外线控制污染

  用紫外线使枯燥的DNA掉活以增加器材外表模板DNA污染的手腕, 机理是经过在相邻的嘧啶碱基之间构成环丁烷而形成DNA毁伤,环丁烷环构成链内的嘧啶二聚体,从而抑制了聚合酶介导的链延长反应。其缺点是不能消弭一切污染,而只能将污染降低几个数量级,而且当DNA片段小于300bp时后果较差。其余象加样器、离心计心情等器材只要一小局部是向着光源的,如许就不能被紫外线有效地去除污染。因此,紫外线照耀仅可认为保持PCR试验室没有污染供给额外的平安保证。

  4.化学加合物控制污染

  用化学加合物,如用异补骨脂素将单链或双链DNA衍生化,这些加合物可防止污染的DNA作为反应的底物。

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